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細胞凍存有何注意事項?

 更新時(shí)間:2023-09-11 點(diǎn)擊量:491

細胞低溫凍存是培養室常用技術(shù)。原理是將細胞放在-196℃液氮中,可以使細胞暫時(shí)脫離生長(cháng)狀態(tài),減少細胞代謝,理論上儲存時(shí)間幾乎是無(wú)限的。那么細胞凍存有何注意事項呢?讓我們一起來(lái)看看吧!

一、DMS0稀釋時(shí)會(huì )釋放大量熱量,不能直接加到細胞液中,須事先配制,且DMSO必須是細胞培養級別的;

二、緩慢冷凍,細胞逐步脫水,不會(huì )因產(chǎn)生大的冰晶而受到損害;

三、選擇細胞生長(cháng)良好、密度約為80-90%、活力達90%以上的細胞凍存;

四、凍存時(shí)細胞密度少于5X105個(gè)活細胞/mL時(shí),很難成功復蘇;

五、細胞不可長(cháng)期保存在-80°C冰箱中。我們建議在-80°C冰箱中的保存時(shí)間不要超過(guò)48h,放入液氮中保存;

六、凍存細胞操作時(shí)應戴防護眼鏡和手套,以免液氮凍傷;

七、凍存管的蓋子一定要擰緊,否則復蘇水浴時(shí)會(huì )滲水,造成支原體污染;

八、定期檢查液氮儲備,保證細胞全部浸在液面下;

九、凍存細胞時(shí)在每支凍存管都標上細胞的名稱(chēng),凍存時(shí)間,并記錄在冊,避免取錯細胞,找不到凍存管等情況;

十、細胞在冷凍過(guò)程中在-20C冰箱內放置時(shí)間不可超過(guò)1小時(shí),以防止冰晶過(guò)大而破壞細胞。

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